細胞名稱：	293FT細胞, 293FT慢病毒包裝細胞,  HEK293-FT細胞，HEK-293FT細胞，表達SV40T抗原人胚腎上皮細胞
出品公司：	Thermofisher
目錄號：	R700-07
種屬來源:	人
組織來源:	胚腎
疾病特征:	正常
細胞形態(tài):	圓形
生長特性:	貼壁生長
應(yīng)用：	293FT細胞主要用于慢病毒包裝，是目前使用*廣泛和效果*好的慢病毒包裝細胞。
培養(yǎng)基:	293FT細胞的1L完整培養(yǎng)基配方如下：        DMEM培養(yǎng)基                                                                          900 ml         胎牛血清                                                                                 100 ml         10mM MEM-NEAA（Non-Essential Amino Acids， 100X）           10  ml        200mM L-Glutamine（100x）                                                10 ml       100mM  MEM丙酮酸鈉（100X）                                                     10 ml       青鏈霉素雙抗 （100x）                                                           10 ml       50 mg/ml遺傳霉素G418（100x）                                           10 ml             配置好的完全培養(yǎng)基*好現(xiàn)配現(xiàn)用，沒有用完的可以放置在4度冰箱中，保存時間可以達到半年！
生長條件:	氣相：空氣，95%；二氧化碳，5-10%; 溫度：37 ℃,
傳代方法:	1：2至1：6，每周2次。
凍存條件:	90% 完全培養(yǎng)基+10% DMSO，液氮儲存
支原體檢測:	陰性
產(chǎn)品說明：	1、 293FT細胞主要用于慢病毒包裝系統(tǒng)，是目前*好的慢病毒包裝細胞株。 2、 293FT細胞來源于293F細胞，穩(wěn)表達SV40 large T抗原。細胞中SV40 large T抗原表達啟動子是CMV啟動子，蛋白表達水平較高而且持續(xù)穩(wěn)定。這使得293FT細胞成為非常適合于慢病毒包裝的宿主細胞。 3、 293FT細胞具有新霉素抗性，該抗性來自細胞中含有的SV40 large T穩(wěn)表達質(zhì)粒（pCMVSPORT6TAg.neo）。該新霉素基因位于SV40啟動子的控制下，因此，在傳代293FT細胞的時候，需要使用遺傳霉素（也叫新霉素或者G418，工作濃度為500 ug/ml）進行抗性篩選傳代。 4、 293FT慢病毒包裝細胞的完全培養(yǎng)基中，需要包含500ug/ml的遺傳霉素，用于細胞的篩選維持。 遺傳霉素（G418）的儲存濃度是50 mg/ml, 是工作濃度的100倍。 5、 慢病毒包裝質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的時候，需要保證細胞已經(jīng)復蘇24-48小時，同時需要保證293FT細胞的活力大于90% 。 6、 293FT細胞是貼壁細胞，傳代的時候，需要進行胰酶消化。 7、DMEM培養(yǎng)基中本身就含有4 mM的L-Glutamine，但是因為L-Glutamine會隨著時間降解，所以在完全培養(yǎng)基中，建議補加2 mM的谷氨酰胺。6 mM濃度的谷氨酰胺，能夠更好維持293FT細胞的生長，更好的包裝慢病毒。 8、293FT細胞的1L完整培養(yǎng)基配方如下：        DMEM培養(yǎng)基                                                                          900 ml         胎牛血清                                                                                 100 ml         10mM MEM-NEAA（Non-Essential Amino Acids， 100X）           10  ml        200mM L-Glutamine（100x）                                                10 ml       100mM  MEM丙酮酸鈉（100X）                                                     10 ml       青鏈霉素雙抗 （100x）                                                           10 ml       50 mg/ml遺傳霉素G418（100x）                                           10 ml            配置好的完全培養(yǎng)基*好現(xiàn)配現(xiàn)用，沒有用完的可以放置在4度冰箱中，保存時間可以達到半年！

293FT表達SV40T抗原人胚腎上皮細胞接受后處理

1) 收到細胞后，請檢查是否漏液 ，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。

 2) 請先在顯微鏡下確認細胞生長 狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。

 3) 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加 6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基。

 4) 如果細胞密度達80%-90%請及 時進行細胞傳代，傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基。

 5) 接到細胞次日，請檢查細胞是 否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系。
 

293FT表達SV40T抗原人胚腎上皮細胞培養(yǎng)操作

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。**天換液并 檢查細胞密度。

 2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。      
   
     1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

     2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  
   
     3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

     4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

 3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；

    1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

    2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。

    3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

293FT表達SV40T抗原人胚腎上皮細胞培養(yǎng)注意事項

 1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn) 象發(fā)生請及 時和我們聯(lián)系。
 
 2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所 需細胞因子 等，確保細胞培養(yǎng)條件一致。若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問 題，責任由客戶自行承擔。

 3.   用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題貼壁細胞會有少量 從瓶 壁脫落，將細胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng) 4~6 小時,再取出觀察。此時多數(shù)細胞均 會貼壁，若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍 染色測定細胞活力，如果證實細胞活力正常， 請將細胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng)；如果染色結(jié)果顯示細胞無活 力，請拍下 照片及時和我們聯(lián)系，信息確認后我們?yōu)槟倜赓M寄送一次。

 4.   靜置細胞貼壁后，請將細胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基倒出，留 6~8mL 維持細胞正常培養(yǎng)，待細 胞匯 合度  80%左右時正常傳代。

 5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用，細胞 傳代時可以 一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合，使細胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。

 6.   建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和 Procell 技術(shù) 部 溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián) 系，告知細胞的具體情況，以便我們 的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

 7.該細胞僅供科研使用。