出品公司:	ATCC
細胞名稱:	MC3T3-E1細胞, ATCC CRL-2594細胞, MC3T3E1細胞, 小鼠顱頂前骨細胞亞克隆14
細胞又名:	MC3T3-E1 SUBCLONE 14
存儲人:	RT Franceschi
種屬來源:	小鼠
組織來源:	顱頂骨
細胞形態(tài):	成纖維細胞樣
生長特性:	貼壁生長
培養(yǎng)基:	MEMα+培養(yǎng)基(GIBCO,貨號11900024)，90%；FBS，10%。
產(chǎn)品目錄號:	CRL-2594
生長條件:	氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%; 溫度：37  ℃,
傳代方法:	1：2至1：6，每周2次。
凍存條件:	90% 完全培養(yǎng)基+10% DMSO，液氮儲存
支原體檢測:	陰性
**等級:	1
應(yīng)用:	該細胞是研究體外成骨細胞分化，特別是細胞外基質(zhì)信號的良好模型。他們的行為類似于原發(fā)性顱骨成骨細胞。
參考文獻:	Wang D, et al. Isolation and characterization of MC3T3-E1 preosteoblast subclones with distinct in vitro and in vivo differentiation/mineralization potential. J. Bone Miner. Res. 14: 893-903, 1999. PubMed: 10352097   forms bone-like ossicles

MC3T3-E1細胞ATCC CRL-2594小鼠顱頂前骨細胞亞克隆14特點和簡介

從克隆的但是表型各異的MC3T3-E1細胞系中分離出一系列亞克隆。 從含抗壞血酸培養(yǎng)基生長的成骨細胞中選擇高或低成骨細胞分化、礦化的亞克隆。 MC3T3亞克隆4（ATCC CRL-2593）和MC3T3亞克隆14（ATCC CRL-2594）在抗壞血酸和3到4mM無機磷酸鹽中生長表現(xiàn)出高水平的成骨細胞分化。 它們10天后形成一個礦化良好的細胞外基質(zhì)（ECM）。 MC3T3亞克隆24（ATCC CRL-2595)和MC3T3亞克隆30(ATCC CRL-2596)在抗壞血酸中生長表現(xiàn)出很差的成骨細胞分化。 不形成ECM， 可以作為亞克隆4和14的陰性對照。 礦化的亞克隆選擇的表達作為成骨細胞標記的mRNA，及唾液酸糖蛋白(BSP)，骨鈣素(OCN)，和甲狀旁腺激素/甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白受體的mRNA。 高或者低的分化潛能的亞克隆在培養(yǎng)中生產(chǎn)出相似數(shù)量的膠原質(zhì)，表達可比較的基本水平的mRNA編碼Osf2/Cbfa1，一種成骨細胞相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子。 植入免疫缺陷小鼠以后，高分化性的亞克隆形成與骨類似的形成小骨的編織骨，低分化細胞只是產(chǎn)生纖維組織。 這些細胞系是研究體外成骨細胞分化的好模型，尤其是ECM信號。 它們和原代培養(yǎng)顱頂成骨細胞的行為類似。 在本庫通過支原體檢測。

MC3T3-E1細胞ATCC CRL-2594小鼠顱頂前骨細胞亞克隆14接受后處理

1) 收到細胞后，請檢查是否漏液 ，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。
  2) 請先在顯微鏡下確認細胞生長 狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
  3) 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加 6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基。
  4) 如果細胞密度達80%-90%請及 時進行細胞傳代，傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的完全培養(yǎng) 基。
  5) 接到細胞次日，請檢查細胞是 否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時與我們?nèi)〉寐?lián) 系。
 

MC3T3-E1細胞ATCC CRL-2594小鼠顱頂前骨細胞亞克隆14培養(yǎng)操作

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然 后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng) 過夜）。**天換液并 檢查細胞密度。
  2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。        1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
       2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶 中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落 ，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。      
     3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
       4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中 或者瓶中。
  3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
        1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
        2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞， 根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍 存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
       3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時 以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

MC3T3-E1細胞ATCC CRL-2594小鼠顱頂前骨細胞亞克隆14培養(yǎng)注意事項

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述 現(xiàn) 象發(fā)生請及 時和我們聯(lián)系。
  2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、 所 需細胞因子 等，確保細胞培養(yǎng)條件一致。若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問 題，責任由客戶 自行承擔。
  3.   用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題貼壁細 胞會有少量 從瓶 壁脫落，將細胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng) 4~6 小時,再取出觀察。此時多數(shù)細胞均 會貼 壁，若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍 染色測定細胞活力，如果證實細胞活力正常， 請將細胞離心后用新鮮 培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng)；如果染色結(jié)果顯示細胞無活 力，請拍下 照片及時和我們聯(lián)系，信息確認后我們?yōu)?您再免費寄送一次。
  4.   靜置細胞貼壁后，請將細胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基倒出，留 6~8mL 維持細胞正常培 養(yǎng)，待細 胞匯 合度  80%左右時正常傳代。
  5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用，細 胞 傳代時可以 一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合，使細胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。
  6.   建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和 Procell 技術(shù) 部 溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián) 系 ，告知細胞的具體情況，以便我們 的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。
  7.該細胞僅供科研使用。